2023, Vol. 31
1882年，Müller Arg.综合运用显微技术与化学分析方法，基于孢子褐色且细胞横向排列的特征, 以Phaeographis dendritica (Ach.) Müll. Arg.作为模式种建立黑文衣属(Phaeographis Müll. Arg.)。Staiger结合分子生物学方法，对Müller Arg.的分类系统进行修正，承认并重新定义黑文衣属[1]。
该属为泛热带分布，隶属于真菌界(Fungi)子囊菌门(Ascomycota)茶渍纲(Lecanoromycetes)厚顶盘亚纲(Ostropomycetidae)厚顶盘目(Ostropales)文字衣科(Graphidaceae)[2]。该属主要特征为地衣体壳状，表面蜡质或粗糙；子囊盘伸长为线状，弯曲或具有分支，少数聚生为类似子座结构；盘唇张开, 大多覆有白色粉霜；盘被不炭化至轻微炭化；子囊含8个孢子；子囊孢子褐色，横隔凸透镜型或砖壁型；共生藻为橘色藻属(Trentepohlia sp.)[3–4]。
目前世界范围内报道黑文衣属约230种，中国仅报道25种[5–10]。因此，有必要对我国黑文衣属类群进行进一步研究，为我国地衣型真菌物种资源开发及利用提供基础资料。
1 材料和方法 1.1 材料本研究标本采自福建、云南，现馆藏于聊城大学生命科学学院地衣标本室(LCUF)。
1.2 表型分析使用体视显微镜OLYMPUS SZX16观察地衣体外部形态特征，光学显微镜OLYMPUS BX53观察解剖特征。通过滴加10% KOH溶液、NaClO饱和水溶液、P溶液(将对苯二胺溶于无水乙醇，配成5%乙醇溶液)、碘液观察颜色反应，薄层层析法(TLC)对地衣化学物质进行鉴定[11–12]。
1.3 基因型分析DNA提取、PCR扩增、测序 使用Sigma-Aldrich REDExtract-N-AmpTM植物PCR试剂盒从子囊盘中提取基因组DNA，并采用引物mtSSU1与mtSSU3R对线粒体小亚基片段进行扩增[13]。PCR体系总体积为50 μL：2×Taq PCR master mix 25 μL，ddH2O 19 μL，引物各2 μL，基因组DNA 2 μL；扩增程序为：95 ℃预变性5 min；然后94 ℃变性45 s，50 ℃退火1 min，72 ℃延伸90 s，共35个循环; 最后72 ℃延伸10 min。PCR完成后，用1%琼脂糖凝胶电泳检测目的产物，并由铂尚生物技术(上海)有限公司测序。序列信息见表 1。
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表 1 系统发育分析所用标本信息和GenBank登录号 Table 1 Specimen information and GenBank accession numbers for phylogenetic analysis |
构建系统发育树 通过SeqMan对原始序列进行拼接处理，选择与黑文衣属亲缘关系较近的灰线衣属Pallidogramme为外类群，在NCBI网站上下载所需的23条相关序列。将上述序列在BioEdit v. 7.0.5中利用最大似然法(Maximum-likelihood, ML)进行多序列比对及优化[14–15]，在Cipres Science Gateway (http://www.phylo.org)使用RAxML-HPC BlackBox v. 8.2.12构建系统发育树[16–17]，对各节点进行1 000次重复以评价自展支持值，获得的系统发育树文件在FigTree v. 1.4.2中查看和编辑(图 1)。
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图 1 基于SSU序列构建的黑文衣属系统发育树 Fig. 1 Phylogenetic tree of Phaeographis based on SSU sequences |
变黄黑文衣 图 2
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图 2 Phaeographis flavescens (L.W. Chen FJ211760)。A: 地衣体和子囊器; B: 子囊盘横切面; C: 子囊; D: 子囊孢子。标尺: A=1.0 mm; B=200 μm; C=20 μm; D=20 μm Fig. 2 Phaeographis flavescens (L.W. Chen FJ211760). A: Thallus with ascomata; B: Cross section of apothecium; C: Ascus; D: Ascospores. Bars: A=1.0 mm; B=200 μm; C=20 μm; D=20 μm |
Phaeographis flavescens Dal-Forno & Eliasaro, Mycotaxon 112: 16(2010)
Type: Brazil, Paraná: Pontal do Paraná. Pontal do Sul, 28. II. 2008, M. Dal-Forno 433 (Holotype UPCB).
地衣体壳状，树皮生，表面浅黄绿色，无光泽，光滑。
子囊盘弯曲，多分支，长0.5~1 mm，宽0.4~ 0.5 mm，聚生于假子座中，假子座圆形至不规则卵圆形；盘缘黑色，相邻线盘之间有小缝隙；盘唇不明显，张开；盘面较宽，平坦，黑褐色，覆有白色粉霜；盘被未炭化，褐色，厚8~18 μm；囊层被黑色，厚15~20 μm；子囊层无色，清晰状，厚80~90 μm; 囊层基黄色，厚30~38 μm；侧丝具有横隔，顶端分支，宽1.0~1.5 μm；子囊棒状，含8个子囊孢子; 子囊孢子褐色，卵圆形，横隔透镜型，(4~)6胞室, 大小19~25.5 μm×6~7 μm，I+紫红色。
化学反应：K+浅黄色，C–，KC+浅黄色，P–；含有斑点酸(TLC)。
基物：树皮。
研究标本：云南：西双版纳，勐海县，哈尼文化园，海拔1 190 m，2015年12月14日，贾泽峰YN15061 (LCUF)。福建：武夷山，桐木村，三港，海拔720 m，2021年10月22日，贾泽峰FJ211286 (LCUF)；武夷山国家公园科技楼附近，海拔700 m，2021年10月24日，贾泽峰FJ211741 (LCUF)，陈乐雯，FJ211759、FJ211760、FJ211761、FJ211763、FJ211764、FJ211765、FJ211766 (LCUF)。
世界分布：巴西[18]；中国福建、云南。
讨论：根据分子数据分析，该种与Phaeographis属其他物种明显分开，且与P. flavescens聚为一独立分支，支持值高达98%，综合以上特征鉴定为P. flavescens。本研究标本与模式标本(Brazil)特征基本一致，但假子座颜色相对更浅，呈白色；另外，本研究只检测出斑点酸，而模式标本描述中还含有其他微量未知酸。其分类特征类似于P. neotricosa Redinger.，后者子囊盘灰白色，弯曲，不规则分支，聚集为星状，孢子4~6室，但地衣化学物质不同, 含有新三锥酸[19]。该种形态学特征与Sarcographa intricans (Nyl.) Müll. Arg.相似，不同之处在于后者子囊盘呈放射状或大量不规则分支，线盘较细长, 盘面在发育后期常发生汇合，从而形成较宽的中部区域；I+红褐色，含降斑点酸[20–21]。该种与S. cuyabensis Redinger.也较相似，不同之处在于后者子囊孢子较小，(12~)15~18 μm[22]。
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